Había varias maneras de entrar en la orden: nacer en ella, como Desmond Miles, o ser reclutados, como Nicolás Maquiavelo. Los Asesinos nacidos en la orden recibían adiestramiento desde los diez años, empezando a recibir las enseñanzas del Credo del Asesino por parte de un maestro, y siendo entrenados por un instructor en combate.

En la Edad Media, la iniciación de los Asesinos consistía en la amputación del dedo anular izquierdo, y posteriormente se recibía una Cuchilla Oculta. Sin embargo, Altaïr Ibn-La'Ahad cambió la costumbre del ritual, y la amputación de un dedo, al ser vista como algo innecesario, se suspendió; en el Renacimiento ya se sellaba el dedo anular con una marca de fuego, y los Asesinos hacían un salto de fe una vez, para terminar su iniciación.

​